Правила взятия и пересылки больных рыб и патологического материала для лабораторных исследований (4 часа)

Содержание. Ознакомление студентов с правилами асептического вскрытия рыбы, взятием, посевом и транспортировкой патологического материала.

Материальное обеспечение. Микроскоп МББ, иммерсионное масло, предмет­ные стекла, стекло со шлифованным краем, смесь Никифорова, метиленовый синий Леффлера или фуксин Пфейфера, ножницы, пинцет, скальпель, инструмен­тарий для вскрытия в стерилизаторе, бактериологическая петля, банка со спир­том для инструментов, 70°-ный спирт для протирания рук, ватные тампоны ил», марлевые салфетки, смоченные водой для протирания инструментов, стерильные пастеровские пипетки, шпадели, цилиндр и банка с дезинфицирующим раствором, стерильные влажные тампоны в чашке Петри, эмалированная кювета с пара­фином и препаровальные иглы для фиксирования рыбы, рыба, чашки Петри, с МПА, карандаш по стеклу.

Больных или подозрительных по заболеванию рыб доставляют в ветери­нарную лабораторию живыми. Для исследования берут 10-15 рыб (стар­шего возраста – 5) на различных стадиях болезни с явно выраженными клиническими признаками.

Рыб перевозят в молочных бидонах или других емкостях, заполненных на 3/4 объема водой из того же водоема, откуда взята проба, или водой из артезианской скважины.

Летом при длительной транспортировке воду с рыбой постепенно охлаж­дают до температуры 12-15 °С, добавляя мелкие кусочки льда. Чтобы не вызвать у рыб температурного шока, нельзя допускать перепад температуры воды исходного водоема и транспортной емкости более 5-7 °С.

Если доставить в лабораторию живую рыбу невозможно, для бактериологического исследования берут кусочки органов и тканей рыб, помешают их в стерильную стеклянную посуду с 40 %-ным водным раствором глице­рина, закрывают пробкой, заливают парафином и отвозят в лабораторию. Кровь, экссудат и другой жидкий патологический материал доставляют в стерильных запаянных пастеровских пипетках, Для микроскопического ис­следования эти же материалы посылают в лабораторию в виде мазков и препаратов-отпечатков (кляч-препаратов).

Для обнаружения бактерий исследуют выделения, органы и ткани рыб, а также кровь, экссудат, содержимое абсцессов, опухолей, инфильтратов, выделения из язв, паренхиматозные органы, содержимое кишечника, слизь с жабр и поверхности тела.

Летом бактериологические исследования патологического материала про­водят не позднее чем через 2 ч после взятия. В исключительных случаях в лаборатории рыбоводного хозяйства делают бактериологические посевы на мясопептонный бульон и мясопептонный агар.

Для вирусологического исследования берут кусочки пораженных органов и тканей массой не более 3-5 г, замораживают или консервируют в 50 %-ном растворе химически чистого глицерина (рН 7,2-7,4) в соотношении 1 : 5-1 : 10, помешают в стерильные флаконы, закрывают пробкой и зали­вают парафином.

Материал для гистологических исследований берут от погибших и вы­нужденно убитых рыб. Мелких рыб (мальков и сеголеток) после вскрытия брюшной полости фиксируют целиком, а от крупных берут органы или кусочки органов размером 2×3 см и толщиной 0,5-1,0 см. Кусочки из по­раженных органов и тканей вырезают так, чтобы были захвачены нормаль­ные и измененные участки. Независимо от степени поражения берут кусочки кожи с подлежащей мускулатурой, жабр, печени, почек, селезенки, сердца, кишечника, плавательного пузыря, головного мозга. Кишечник перед фикса­цией осторожно вскрывают или делают на нем несколько надрезов, чтобы фиксирующая жидкость проникла в его полость. Головной мозг осторожно извлекают после вскрытия черепной коробки.

Подлежащий исследованию материал помещают в широкогорлую стеклянную банку и фиксируют 10 %-ным формалином в объеме, в 10 раз превышающем объем взятого материала.

Для гистохимических исследований патологического материала в каче­стве фиксатора используют жидкость Карнуа (спирт абсолютный – 60 мл, хлороформ – 30 мл и ледяная уксусная кислота – 10 мл) или жидкость Буэна (насыщенный раствор пикриновой кислоты – 75 мл, концентрирован­ный формалин – 25 мл, ледяная уксусная кислота – 5 мл). Так как выбор фиксатора зависит от цели дальнейшей обработки материала, на этикетке указывают фиксирующий раствор.

Кровь для исследования берут из сердца или из хвостовой артерии. Чешую на месте взятия крови снимают скальпелем, вытирают слизь, кожу дезинфицируют 70%-ным спиртом. Кровь набирают в пастеровскую пипетку, переносят на часовое стекло и быстро берут необходимое количество для гематологических исследований. Мазки крови для исследования на крове-паразитов, выведения лейкоцитарной формулы готовят обычным способом, высушивают, нумеруют, завертывают каждый в чистую бумагу и направляют в лабораторию.

Для биохимических исследований берут цельную кровь в пробирки, до­бавляют к ней лимоннокислый или щавелевокислый натрий (на 1 мл 2 мг), раствор гепарина (1000 ЕД/мл), наклеивают этикетку и направляют в вете­ринарную лабораторию.

Сыворотку крови для биохимических и серологических исследований получают следующим образом. Кровь собирают в небольшие пробирки и оставляют при комнатной температуре для свертывания. Отделившуюся от кровяного сгустка сыворотку отсасывают стерильной пастеровской пипеткой и отправляют в лабораторию в запаянных ампулах. Сыворотку, предназна­ченную для серологических исследований, консервируют 2%-ной борной кислотой или 0,05 %-ным фенолом (1-2 капли 5 %-ного фенола на 1 мл сыворотки), или тиомерсалом 1:10 000. Цельную кровь и сыворотку транс­портируют в термосе со льдом. Материал должен быть доставлен в течение суток после взятия.

У крупных рыб извлекают пораженные паразитами органы (жабры, кишечник, печень и другие ткани) и помещают в банки с консервирующей жидкостью (70%-ный этиловый спирт или 4 %-ный раствор формалина). Паразитических организмов, а также кусочки органов и тканей, где обнару­жены паразиты, помещают в пробирки или флаконы с консервирующей жидкостью. При подозрении на протозойные болезни из исследуемого мате­риала делают мазок и сразу опускают его на 15-20 мин в жидкость Шаудина (50 мл насыщенного раствора сулемы и 25 мл абсолютного спирта). Маленькие кусочки тканей и органов, пораженных паразитическими простей­шими, фиксируют в указанной смеси 30-120 мин. Затем стекла промывают водой и спиртами возрастающей крепости (50-60-70 %) и сохраняют в 70 %-ном спирте до исследования. Влажные мазки, кусочки органов и тканей с паразитами можно фиксировать также в жидкости Буэна. Фиксация мазков 1-20 мин, кусочков ­– 1-12 ч.

Перед консервированием гельминтов тщательно промывают в физиологическом растворе и выдерживают в нем до гибели паразитов.

Моногенетических сосальщиков (дактилогирусы, гиродактилюсы и др.) консервируют в 4 %-ном растворе формалина или глицерин-желатине (под покровным стеклом). Трематод и мелких цестод кладут на предметные стек­ла, накрывают покровным стеклом и помещают на несколько часов в бак­териологическую чашку с 70 %-ным спиртом. Затем при помощи кисточки гельминтов перекладывают в пробирку с 70 %-ным спиртом.

Нематод и личиночные стадии цестод консервируют в жидкости Барбагалло (3 %-ный раствор формалина на изотоническом растворе поваренной соли: 30 мл формалина, 9 г поваренной соли, 1000 мл дистиллированной воды). Для изготовления постоянных препаратов в канадском бальзаме живых нематод лучше консервировать в 70 %-ном горячем спирте.

Крупных ленточных гельминтов после умерщвления в физиологическом растворе помещают в 70 %-ный спирт.

При консервировании скребней в 70 %-ном спирте осторожно выдавли­вают хоботок из влагалища путем слабого прессования переднего конца скребней под покровным стеклом.

Паразитических рачков консервируют в 3 %-ном растворе формалина и сразу же переносят для хранения в 70 %-ный спирт.

Пиявок фиксируют в 4 %-ном растворе формалина. При этом у них сохраняется пигментация, что облегчает диагностику вида.

Патологический материал, предназначенный для бактериологического, паразитологического и других исследований, снабжают этикеткой, где указы­вают вид и возраст рыбы, название органа, из которого взят материал. Если в одну посуду помещают несколько объектов исследования, этикетку при­крепляют к каждой рыбе (мальку, сеголетку) или органу или отдельные кусочки органа завязывают вместе с этикеткой в марлю. Этикетки надписы­вают простым карандашом и опускают в посуду с материалом таким обра­зом, чтобы можно было легко прочесть надпись.

Планктон собирают в водоеме планктонной сеткой, исследуют его в жи­вом виде или консервируют в жидкости Барбагалло. Грунт для исследования берут со дна водоема дночерпателем в количестве 2 кг.

Контрольные вопросы.

1. Как проводят клинический осмотр рыбы?

2. Какое количество рыбы подвергают клиническому осмотру?

3. На какие признаки обращают внимание при клиническом осмотре?

4. Как обездвижить рыбу?

5. Назовите порядок патологоанатомического вскрытия?

6. На какие признаки обращают внимание при патологоанатомическом вскрытии?