Качественное определение

Для анализа используют цельную кровь, обработанную гепарином или другим стабилизатором, предохраняющим ее от свертывания. К разбавленным пробам (1:4) исследуемой и нормальной крови добавляют примерно тройной объем 1% раствора танина. Нормальная кровь приобретает серую краску, а кровь, содержащая карбоксигемоглобин, не изменяется.

Аналогичное испытание проводится при добавлении формалина. При этом нормальная кровь принимает грязно-бурую окраску, а исследуемая кровь, содержащая карбоксигемоглобин, сохраняет свою окраску в течение нескольких недель.

При отсутствии в лаборатории указанных реагентов можно использовать 30% раствор гидроксида натрия, который добавляют к пробам крови, разбавленным водой 1:100. Кровь, не содержащая карбоксигемоглобина, приобретает зелено-черную окраску. В присутствии карбоксигемоглобина сохраняется розовый цвет крови.

Карбоксигемоглобин можно обнаружить в крови, используя метод микродиффузии, основанный на реакции с хлоридом палладия, и спек-трофотометрически.

Количественное определение

Количественное определение карбоксигемоглобина (НЬ • СО) в крови основано на том, что как оксигемоглобин (НЬ • О2), так и метгемоглобин могут быть восстановлены дитионитом натрия, а НЬ • СО с этим реагентом не взаимодействует.

Для определения необходимы водный раствор аммиака (1 мл/л); твердый дитионит натрия Na2S2O4 • 2Н2О (хранится в эксикаторе); баллон с чистым газообразным СО или смесью СО и азота; баллон с газообразным кислородом или сжатым воздухом. Возможно получение СО взаимодействием концентрированных серной и муравьиной кислот.

Для определения 0,2 мл крови добавляют к 25 мл раствора аммиака и тщательно перемешивают. Пробу делят на 3 примерно равные порции А, В и С.

Порцию А хранят в закупоренной пробирке. Порцию крови В насыщают оксидом углерода до полного замещения кислорода на СО (т.е. для получения 100 % НЬ • СО), продувая газ через раствор в течение 5— 10 мин. Порцию С насыщают кислородом, продувая чистый кислород или сжатый воздух через раствор в течение 10 мин для полного замещения СО на кислород (0% НЬ • СО). К каждому раствору (А, В, С) добавляют небольшое количество (около 20 мг) Na2S2O4 • 2Н2О и 10 мл раствора аммиака и перемешивают. Снимают спектр в видимой области или измеряют поглощение при 540 и 579 нм. В качестве раствора сравнения используют раствор дитионита натрия в водном растворе аммиака.

Долю насыщения карбоксигемоглобином можно рассчитать по следующей формуле:

HbCO (%) = {(А540/A579 раствор А) – (А540579 раствор С) * 100%}/ {(A540/ A579раствор В) - (А540579 раствор С)},

принимая во внимание, что

540 / А579 раствор В) = 1,5, что соответствует 100 % НЬСО,

540579 раствор С) = 1,1, что соответствует 0 % НЬСО.

Измерения проводят в области максимальной разности между поглощением НЬ • СО [λ max (Hb*CO) =540 нм] и точке равного поглощения НЬ • СО и НЬ • О2 (579 нм, изобестическая точка).

Присутствие на спектре раствора А двух почти симметричных пиков («кроличьи уши») — характерный признак отравления угарным газом.

Заключение

В продуктах горения полимеров можно обнаружить более 140 веществ, то есть отравление людей происходит при комбинированном воздействии многих летучих ядов. Многофакторное влияние при пожарах затрудняет судебно-химическую экспертизу крови погибших. В большинстве случаев анализ крови ограничивается обнаружением угарного газа.

В подавляющем большинстве случаев отравления происходят по вине самих пострадавших: неправильная эксплуатация отопительных печей, газовых колонок, курение в постели (особенно в нетрезвом виде), ведущее к возникновению пожара; хранение спичек в доступных для детей местах; длительное пребывание в закрытом гараже, где находится автомобиль с работающим двигателем, длительный отдых (сон) в автомобиле с включенным обогревателем и мотором, даже если автомобиль находится на открытом воздухе. Особенно важно проведение с населением бесед и лекций по профилактике отравлений угарным газом в осенне-зимнее время года.

В заключение следует сказать, что, несмотря на значительные успехи в изучении проблем механизма действия ядов, далеко не у всех ядовитых веществ биохимический механизм действия полностью раскрыт. Многие сложные вопросы взаимодействия различных химических агентов с разными ферментами еще не решены.

Список используемой литературы

1. Гуськова Т. А. Токсикология лекарственных средств. – М.: Рус. врач, 2003. – 154 с.

2. Токсикологическая химия: учебник для вузов/ под ред. Т.В. Плетеневой. – 2-е изд., испр. – М.: ГЭОТАР – Медиа, 2006. – 512 с.

3. Руденко Б.А., Руденко Г.И. Высокоэффективные хроматографические процессы. Т.1. Газовая хроматография. – М: Наука, 2003.

4. Харитонов Ю. Я. Аналитическая химия (аналитика): В 2 кн. – М.: Высш. шк.,2001.

5. Долгов В., Морозова В., Марцышевская Р. Клинико – диагностическое значение лабораторных показателей. – М.:»Центр», 1995.

6. Справочник «Медицинская лабораторная диагностика»/под ред. Карпищенко А.И. – СПб: «Интермедика», 1997.

7. Белоусов Ю.Б., Моисеев В.С., Лепахин В.К. Клиническая фармакология и фармакотерапия. М., 1997.

8. Метью Дж. Элленхорн. Медицинская токсикология: Т.1-2. – М.: Медицина, 2003.

9. Харкевич Д. А. Фармакология. — М.: ГЭОТАР-МЕД, 2001.

Наши рекомендации