Свойства плазмы. механизмы свертывания крови
1.4.1. Анализ механизма свертывания крови
Цель работы: изучить механизмы свертывания крови, выяснить значение свертывающих и противосвертывающих факторов.
Объект исследования– кровь человека.
Свертывание крови относится к важнейшим защитным реакциям организма. Свертываясь, кровь образует сгустки, что ведет к прекращению кровотечения. Свертывание крови обусловлено функцией свертывающей системы, под которой представляют сложный биохимический и физиологический комплекс.
Для работы необходимо: Донорская кровь, 7 пробирок (одна из них мерная), штатив. Растворы гепарина (1:100), щавелевокислого натрия (5%), хлористого кальция (5%), пипетка для забора плазмы крови, металлическая «метелка» для дефибринирования крови, стакан с холодной водой и льдом, секундомер, центрифуга.
Проведение работы
1.Взять пробирки 1, 2, 3, 4, 5. Предварительно в пробирку 4 налить 1-2 капли гепарина (раствор 1:100), в пробирку 5 – 0,5 мл щавелевокислого натрия. Затем во все пробирки налить донорскую кровь в следующем объеме:
Пробирка 1 – 1 мл,
Пробирка 2 – 1 мл,
Пробирка 3 – 4 мл,
Пробирка 4 – 1 мл,
Пробирка 5 – 4 мл.
Заметить время взятия крови.
2.Пробирку 1 поместить в штатив, а пробирку 2 – в стакан с холодной водой. В обеих пробирках наблюдать скорость свертывания крови. Для этого каждую минуту с момента взятия крови наклонять пробирку. Как только образуется сгусток, кровь перестает вытекать из пробирки. Отметить разницу во времени свертывания крови в 1-ой и 2-ой пробирках.
3.Кровь в пробирке 3 сразу же после взятия взбалтывать «метелочкой» в течение 10-15 минут. Выпадающие нити фибрина наматываются на «метелочку» и кровь теряет способность свертываться. Под водопроводной водой отмыть нити фибрина от эритроцитов.
4.Содержимое пробирки 4 хорошо перемешать, через 15-20 минут наклонить пробирку и отметить отсутствие сгустка.
5.Содержимое пробирки 5 хорошо перемешать. Выждав 20 минут, половину крови из пробирки 5 отлить в пробирку 6 и добавить в нее 1 каплю 5% раствора CaCl2. Отметить восстановление способности крови к свертыванию.
6.Пробирку 5 отдать лаборанту для центрифугирования. В процессе центрифугирования кровь в пробирке 5 разделится на плазму и форменные элементы. Осторожно специальной пипеткой перенести плазму в пробирку 7, прибавить к ней одну каплю 5% раствора CaCl2. Отметить, что процесс свертывания крови протекает в плазме. Проследить время образования «белого» сгустка.
Оформление протокола. Начертить таблицу, заполнить ее по образцу, в графе 4 написать ожидаемый результат, в графе выводы – указать причину соответствующей реакции. Зарисовать схемы: сосудисто-тромбоцитарного и коагуляционного гемостаза, таблицу антисвертывающей системы крови.
Таблица оформления протокола
| № пробирки | Количество крови | Воздействие | Изменение времени свертывания* | Выводы** |
| - | ||||
| холод | ||||
| дефибринирование | ||||
| гепарин | ||||
| щавелевокислый натрий | ||||
| 2 мл из пробирки 5 | CaCl2 | |||
| плазма из пробирки 5 после центрифугирования | CaCl2 |
Примечание: * - увеличилось, уменьшилось, осталось в норме;
** - графу 5 сделать самой широкой, чтобы вместить текст выводов.
1.4.2. Определение времени свертывания крови по способу
Масс и Магро
Цель работы:познакомиться с методикой определения времени свертывания крови
Объект исследования – кровь человека.
Для работы необходимы: кровь донора, часовое стекло, покрытое тонким слоем парафина, капилляр от гемометра Сали, вазелиновое масло.
Проведение работы. На покрытое парафином часовое стекло помещают каплю вазелинового масла. Из пальца капилляром, предварительно смоченным изнутри вазелиновым маслом, берут каплю крови, помещают ее в каплю вазелинового масла на стекле. Каждые две минуты кровь снова насасывают в капилляр, выдувая ее затем обратно на часовое стекло. С момента наступления свертывания насосать кровь становится невозможно. Замечают время от момента взятия крови до начала свертывания. В норме у человека при температуре воздуха 15 – 25оС по этой методике оно равно 8 – 12 минутам.
Оформление протокола. Кратко опишите принцип метода определение времени свертывания крови по методу Масс и Магро.
Вывод.Укажите нормальную величину этого показателя.
1.4.3. Коагулография
Цель работы:познакомиться с основными принципами работы электрокоагулометра.
Объект исследования - кровь человека
С помощью прибора электрокоагулографа регистрируются начало свертывания, и изменения электрического сопротивления сгустка крови во времени. Метод позволяет определять образование, ретракцию и лизис сгустка крови.
Реактивы: 1. 3,8% раствор цитрата натрия; 2. раствор хлорида кальция (концентрация указываетсяв инструкции к прибору).
Оборудование: Коагулограф Н-334.
Материал для исследования: цельная нестабилизированная кровь (в этом случае реактивы не требуются), цитратная кровь, цитратная плазма.
Нормальные величины: устанавливаются эмпирически для каждого прибора.
Клиническое значение. С помощью электрокоагулографа могут быть выявлено и количественно оценено хронометрическая и/или структурная гипокоагуляция (замедленное свертывание и /или образование сгустка с недостаточно высоким сопротивлением), хронометрическая и/или структурная гиперкоагуляция (ускоренное свертывание и /или образование сгустка с чрезмерно высоким сопротивлением). Кроме того, диагностируются гипофибринолиз и гиперфибринолиз (замедленное или ускоренное уменьшение электрического сопротивления образовавшегося сгустка крови после достижения максимальных значений).
Проведение работы
1.Произвести включение прибора и подогревающей камеры термостата кнопкой ВКЛ.
2.Открыть крышку камеры термостата.
3.Взять подогретую в течение 10 минут ячейку и залить в нее кровь.
4.Закрыть крышку ячейки и установить ее в камеру, на качающейся держатель.
5.Закрыть камеру и нажать кнопку МОТОР на передней панели коагулографа.
6.Запись вести в течение 20-30 минут.
Получение результатов
Определяют:
1) начало свертывания крови - Т1 (до первого колебания с уменьшенной амплитудой);
2) конец свертывания крови - Т2 (до первого колебания с минимальной амплитудой);
3) продолжительность процесса свертывания - Т (= Т2 - Т1);
Примечание: время считают от момента забора крови, записывают в секундах (Скорость движения диаграммы = 600 мм/ч = 1/6 мм/сек, следовательно, t=6´S или время между двумя импульсами = 10 сек).
Задачи
1. Как можно доказать в лабораторной работе роль ионов кальция в свертывании крови.
2. В исследуемой крови содержится 200´109/л тромбоцитов, длительность кровотечения 5 мин. Оцените полученные результаты.
3. Больного готовят к операции. Время свертывания крови по методу Масс и Магро 8 мин. Операцию отложили, назначили лечение. Оцените показатель свертывания крови. Почему отложили операцию, какую группу препаратов необходимо назначить в этой ситуации?
4. Проведен клинический анализ крови, в частности, определено время свертывания крови по методу Масс и Магро - 7 мин. Оцените полученные результаты. Укажите возможные причины изменений коагуляции крови.
5. Взяли кровь у кролика в пробирке. Во вторую пробирку предварительно добавили раствор лимоннокислого натрия. Когда произойдет свертывание крови в той и другой пробирке.
6. Взяли кровь у кролика в две пробирки: одну пробирку оставили при комнатной температуре, другую - поместили в воду с температурой +5 °C. Когда произойдет свертывание в той и другой пробирке?
7. Время свертывания крови по методу Масс и Магро - 18 мин. Оцените показатель свертывания крови.
8. В исследуемой крови содержание тромбоцитов составило 250 х 109 /л. Оцените полученный результат.
9. Подсчет тромбоцитов в крови показал, что содержание их составляет 50 х 109/л. Оцените этот показатель. Какие изменения в организме могут быть связаны с таким содержанием тромбоцитов.
10.Встречаются случаи прижизненного образования тромбов в сосудах различных органов. Объясните, почему в нормальных физиологических условиях кровь в сосудах не свертывается?
ГЛАВА 2