Применение спектрофотометрии в анализе рутина, цианокобаламина.

СФМ используется для идентификации соединений, исследования состава, строения и количественного анализа индивидуальных в-в и многокомпонентных систем. Кривая зависимости поглощения от длины волны называется спектром поглощения в-ва и является специфической характеристикой данного в-ва.

Спектрофотометры – приборы, позволяющие проводить анализ как окрашенных, так и бесцветных соединений по избирательному поглощению монохроматического излучения в видимой, УФ и ИК областях спектра.

• Определение цианокобаламина (согл. ГФ 10)

Около 0,1 г препарата (точная навеска) растворяют в воде в мерной колбе емкостью 500 мл и доводят объем раствора водой до метки. 25 мл этого р-ра переносят в мерную колбу емкостью 250 мл и доводят объем водой до метки. Определяют оптическую плотность полученного р-ра на спектрофотометре при длине волны 361 нм в кювете с толщиной слоя 1 см. Содержание цианокобаламина вычисляют по формуле:

где D – оптическая плотность

207 – удельный показатель поглощения чистого цианокобаламина при длине волны 361 нм

а – навеска в граммах

Содержание в пересчете на сухое в-во должно быть не менее 95,0%

• Определение содержания рутина (согл. ГФ 10)

Около 0,025 г препарата (точная навеска) растворяют в 10 мл горячего абсолютного спирта и фильтруют через стеклянный фильтр №4 при слабом разрежении. Фильтр промывают горячим абсолютным спиртом (2 раза по 10 мл). Объединенные фильтраты переносят в мерную колбу на 100 мл, охлаждают и доводят до метки тем же спиртом. 5 мл спиртового р-ра помещают в мерную колбу на 50 мл и доводят до метки абсолютным спиртом. Определяют оптическую плотность полученного р-ра на спектрофотометре при длинах волн 375 нм (D1) и 362,5 нм (D2) в кювете с толщиной слоя 1 см. Если отношение D1/D2 находится в пределах 0,875±0,004, то содержание рутина вычисляют по формуле:

где 325,5 – удельный показатель поглощения чистого рутина при 362,5 нм в абсолютном спирте

а – навеска в граммах

Если отношение D1/D2 превышает 0,879, то содержание рутина в процентах вычисляют по формуле:

Содержание рутина в пересчете на сухое в-ва должно быть не менее 95,0%

35. Применение фотоэлектроколориметрии для количественного определения пиридоксина гидрохлорида и производных нитрофурана.

Фотоколориметрический метод основан на измерении сте­пени поглощения немонохроматического света испытуемым веществом с помощью фотоэлектроколориметров.

При отсутствии линейной зависимости между с и D для определения с следует пользоваться калибровочными графи­ками, построенными для каждого определяемого вещества.

Наиболее распространенными являются две принципиаль­ные схемы фотоэлектроколориметров:

1) схема прямого действия с одним фотоэлементом, предусматривающая измерение оптической плотности по силе фототока, регистрируемой гальванометром;

2) дифференциальная схема с двумя фотоэлементами, рассчитанная на попадание пучков света, проходящих соот­ветственно через испытуемый и нулевой растворы, на два разных фотоэлемента. Фототоки уравнивают с помощью потенциометра (электрическая компенсация) или диафрагмы, уменьшающей интенсивность одного из световых пучков (оп­тическая компенсация).

По шкале потенциометра или диафрагмы отсчитывают оптическую плотность в момент равенства фототоков, когда стрелка регистрирующего гальванометра находится на нуле.

· Определение содержания пиридоксина г/хл:

Точную навеску таблеток, содержащую около 12,5 мг пиридоксина г/хл, растворяют в 0,5% р-ре соляной к-ты в мерной колбе на 100 мл. Доводят объем до метки тем же р-ром, перемешивают и фильтруют. 2 мл фильтрата переносят в мерную колбу на 50 мл, , доводят объем тем же раствором соляной кислоты до метки и перемешивают. К 4 мл полученного раствора добавляют 7 мл 0,5% раствора соляной кислоты, 1 мл воды, 5 мл изопропилового спирта, 2 мл аммиачного буферного раствора, 1 мл раствора 2,6-дихлорхинонхлоримида и через 2 минуты измеряют оптическую плотность раствора на фотоэлектроколориметре при длине волны 620 нм (красный светофильтр) в кювете с толщиной слоя 3 см. Одновременно проводят контрольный опыт. Для этого к 4 мл испытуемого раствора приливают указанные выше растворы, добавляя вместо воды 1 мл раствора борной кислоты.

Параллельно таким же образом проводят опыт с 4 мл раствора стан­дартного образца пиридоксина гидрохлорида.

Содержание пиридоксина гидрохлорида в миллиграммах (X) в одной таблетке вычисляют по формуле:

где D1 – оптическая плотность испытуемого р-ра

D2 – оптическая плотность контроля к испытуемому р-ру

D0 – оптическая плотность р-ра стандартного образца

D3 – оптическая плотность контроля к р-ру стандартного образца

а – навеска в граммах

б – средний вес таблетки в граммах

• Производные нитрофурана (на примере фуразолидона):

Около 0,1 г препарата (точная навеска) помещают в мерную колбу емкостью 50 мл, прибавляют 30 мл, предва­рительно четыре раза перегнанного диметилформамида (плотность не более 0,945), закрывают колбу притертой пробкой. После растворения препарата прибавляют 2 мл 0,05 н. спиртового раствора едкого кали, перемешивают, охлаждают до 20°, доводят объем раствора диметилформамидом до метки и опять хорошо перемешивают.

0,6 мл раствора помещают в мерную колбу емкостью 100 мл, доводят объем раствора водой до метки и точно через 20 минут, считая с мо­мента прибавления 0,05 н. спиртового раствора едкого кали, определяют оптическую плотность полученного раствора на фотоэлектроколориметре в кювете с толщиной слоя 0.5 см и фиолетовым светофильтром с дли­ной волны около 360 нм. Во вторую кювету наливают воду.

Во время проведения опытов температура растворов должна быть 20±1°. Место приготовления растворов не должно быть ярко освещено.

Содержание фуразолидона в процентах (X) вычисляют по следующей формуле:

где D – оптическая плотность испытуемого р-ра

E1% - удельный показатель поглощения стандартного образца, определенный в тех же условиях

а – навеска препарата в граммах

Содержание в-ва в пересчете на сухое в-во должно быть не менее 98% и не более 102%