Правила техники безопасности при работе в микробиологической лаборатории

Лабораторная работа № 1

Техника безопасности в микробиологической лаборатории. Правила работы и оформления лабораторных отчётов. Строение грибов. Вегетативные и репродуктивные структуры

Цель работы:познакомиться с техникой безопасности в микробиологической лаборатории, с правилами работы и оформления лабораторных отчетов по дисциплине «Микология»; изучить особенности строения вегетативных и генеративных структур грибов.

Задачи:

1. познакомиться с техникой безопасности в микробиологической лаборатории;

2. ознакомиться с правилами работы и оформления лабораторных отчетов по дисциплине «Микология»;

3. освоить методику изготовления временных препаратов грибов;

4. изучить особенности строения дрожжеподобного таллома грибов, видоизменений вегетативных гиф, плодовых тел и спор.

Правила техники безопасности при работе в микробиологической лаборатории

Находясь в лаборатории, необходимо выполнять следующие общие требования и меры предосторожности:

1) запрещается входить в лабораторию в верхней одежде;

2) работать в лаборатории – только в специальном халате;

3) на каждом лабораторном занятии назначается дежурный, который отвечает за санитарное состояние лаборатории на время занятия;

4) открывать окна можно только по разрешению преподавателя;

5) запрещается приносить и употреблять в пищу напитки и продукты;

6) включать и выключать тумблеры в электрическом щитке можно только с разрешения преподавателя;

7) при работе с оборудованием и оптическими приборами в случае обнаружения неисправности приборов, электропроводки или розеток нужно сообщить об этом преподавателю. Запрещается самому производить ремонт;

8) при изготовлении временных препаратов осторожно обращаться с режущими инструментами и стеклами. В случае нанесения порезов необходимо поставить об этом в известность преподавателя (для оказания медицинской помощи);

9) запрещается выбрасывать сломанные предметные и покровные стекла в мусоросборник, осколки необходимо складывать в специальный контейнер;

10) для работы с фиксированными в спирте объектами необходимо использовать пинцет;

11) по окончании работы следует сдать инструменты и отработанные препараты преподавателю; микроскопы отключить от сети и накрыть чехлами; навести порядок на рабочем месте, сдать дежурному.

При работе с реактивами необходимо соблюдать следующие правила:

работу с концентрированными кислотами, щелочами и ядовитыми веществами можно проводить только в вытяжном шкафу; наливать или насыпать реактивы следует только над столом; не следует оставлять открытыми банки с реактивами; пролитые или рассыпанные реактивы нужно немедленно удалить со стола с помощью тряпки и промыть поверхность водой.

ОБЩИЕ МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ ПО ПРОВЕДЕНИЮ ЛАБОРАТОРНЫХ ЗАНЯТИЙ ПО МИКОЛОГИИ И ОТЧЕТНОСТЬ СТУДЕНТОВ

1. Студент должен приходить на лабораторное занятие, подготовив теоретический материал по теме лабораторного занятия в объеме программы.

2. Для работы надо иметь альбом для рисования, простой карандаш (можно использовать для зарисовки также цветные карандаши), карандашную резинку. На весь период работы следует приобрести пачку лезвий для безопасной бритвы.

3. Альбом должен вестись аккуратно и быть подписан:

АЛЬБОМ

для лабораторных занятий по дисциплине «Микология»

студента II курса, 2220 группы

(фамилия, инициалы)

4. На каждом занятии надо указывать в альбоме номер занятия, дату, название темы.

5. Все объекты должны быть тщательно рассмотрены вначале при малом (объектив Ув. х 4), затем при большом (объектив Ув. х 10; Ув х 40) увеличении и аккуратно зарисованы с указанием их систематического положения.

При небрежном ведении альбома отработанное лабораторное занятие не засчитывается.

6. Перед приготовлением временного препарата следует протереть салфеткой покровное и предметное стекла. Нанести на предметное стекло каплю воды. Стараться, чтобы капля была в центре и не сильно растекалась по стеклу.

7. Поместить в каплю воды рассматриваемый материал (мицелий, налет спороносных структур и т.п.) и тщательно его расправить при помощи препаровальной иглы. Для лучшей смачиваемости рассматриваемого материала иногда целесообразно использовать уксусную кислоту.

8. Чтобы рассмотреть плотные структуры, необходимо приготовить срез объекта. Для этого объект помещают в расщепленную сердцевину бузины или, если объект достаточно твердый, режут его непосредственно. Объект держат в левой руке строго вертикально, лезвие – большим и указательным пальцами правой руки строго горизонтально. Лезвие плавно перемещают, не напрягая руку. Приготовленный срез помещают в каплю жидкости. Необходимо сделать несколько срезов, чтобы иметь возможность выбора.

9. Покрывать срез покровным стеклом следует осторожно: вначале коснуться жидкости краем стекла, а после плавно опустить стекло. Жидкость должна равномерно растечься. Если под стеклом окажутся пузырьки воздуха, следует осторожно постучать препаровальной иглой по стеклу или слегка приподнять стекло иглой и вновь опустить. Покровное стекло должно плотно прилегать к предметному. Лишнюю жидкость следует убрать с помощью фильтровальной бумаги. Если жидкости под стеклом недостаточно, необходимо добавить ее, поместив с помощью пипетки каплю возле покровного стекла.

10. Рисунки располагаются только с одной стороны альбомного листа не более 3-4 на страницу.

11. Рисунок должен выполняться непосредственно с рассматриваемого объекта простым карандашом, быть достаточно крупным, выразительным, иметь подрисуночную подпись, например: Строение гимения сыроежки (Russula sp.).

12. Все детали рисунка должны быть четко обозначены. Указательные стрелки ставятся простым карандашом; надписи располагаются только по горизонтали.

13. По требованию преподавателя студент должен сдавать альбом для проверки.

14. Студенты обязаны бережно относиться к микроскопической технике, материалам и всему оборудованию, которое им предоставляется для выполнения лабораторной работы.

15. Студенты должны строго соблюдать правила техники безопасности, осторожно обращаться с колющими и режущими предметами, фиксированным материалом и реактивами.

16. Студент обязан отработать все лабораторные занятия и сдать отчёты по лабораторным работам и по контролю самостоятельной работы. Пропущенные лабораторные занятия (независимо от причины пропуска) надо отработать. Графики отработки составляются по согласованию с преподавателем.

17. После выполнения программы лекционных и лабораторных занятий студент допускается к сдаче экзамена по теоретическому курсу.

Теория. Строение вегетативного тела грибов. Тело подавляющего большинства грибов представляет собой мицелий, состоящий из тонких бесцветных трубчатых нитей, или гиф, с верхушечным ростом и боковым ветвлением. У ряда грибов мицелий лишен перегородок (нечленистый, несептированный или ценоцитный) и представляет собой как бы одну гигантскую, часто сильно разветвленную клетку с большим количеством ядер. Ценоцитный мицелий известен у многих водных (сапролегния и др.) и наземных грибов ( мукор, ризопус и др.). Некоторые представители грибов образуют лишь зачатки мицелия в виде тонких безъядерных нитей – ризомицелий.

У большинства грибов гифы мицелия разделены поперечными перегородками, или септами, на отдельные клетки. Такой мицелий называют септированным, или клеточным. Перегородки у грибов образуются путем инвагинации ( впячивания) плазматической мембраны внутрь клетки, к ее центру ( центрипетально), где всегда остается небольшое отверстие – пора. Поры обеспечивают тесное взаимодействие между клетками мицелия за счет взаимного перемещения питательных веществ и даже миграции органелл (ядра, митохондрии и т.д.).

Дрожжи, как и грибы-внутриклеточные паразиты, мицелия не имеют. Вегетативное тело дрожжей состоит из одиночных почкующихся или делящихся клеток, а у внутриклеточных паразитов – из голого протопласта без клеточной стенки. Такое вегетативное тело обычно недолговечно, через несколько дней оно превращается в зооспорангий с подвижными спорами, которые снова заражают подходящего хозяина.

С филогенетических позиций наиболее совершенной формой тела гриба является септированный мицелий, имеющий неограниченный рост за счет деления клеток и способный тем самым эффективно использовать субстрат.

Кроме того, мицелий дифференцируется на две функционально различные части: субстратный, служащий для прикрепления к субстрату, поглощения и транспортировки воды и растворенных в ней питательных веществ, и воздушный, поднимающийся над субстратом и образующий органы размножения.

В процессе жизнедеятельности у грибов возникают многочисленные приспособления к различным условиям их обитания за счет видоизменения мицелия в ложную ткань – плектенхиму либо мицелиальные тяжи, ризоморфы, склероции и др.

Плектенхима в отличие от настоящей ткани, образующейся при делении клеток во всех направлениях, формируется в результате переплетения и срастания нитей мицелия, каждая из которых делится только в одном поперечном направлении. Из плектенхимы состоят плодовые тела шляпочных грибов.

Мицелиальные тяжи представляют собой плотно склеенные слизистым веществом пучки гиф толщиной до нескольких миллиметров. Они хорошо заметны у основания крупных плодовых тел шляпочных грибов, трутовиков, гастеромицетов в виде беловатых или окрашенных нитей. По ним протекают вода и питательные вещества.

Хорошо развитые и дифференцированные мицелиальные тяжи получили название ризоморф. Их наружные гифы имеют утолщенные темноокрашенные стенки и выполняют защитную функцию, а внутренние (тонкостенные и светлоокрашенные) – проводящую. Ризоморфы могут достигать нескольких метров в длину, позволяя грибам преодолевать значительные препятствия, например участки каменных стен (домовой гриб) или сухие стволы деревьев (осенний опенок). При помощи ризоморф опенок легко перемещается от дерева к дереву и вызывает их заражение. Кроме того, он способен формировать плодовые тела на деревьях на высоте 2–3 м и более над землей.

Склероции – плотные переплетения гиф мицелия – служат для перенесения неблагоприятных условий зимой, во время засухи и т. д. Они имеют различные формы (шаровидную, овальную, в виде рожков и др.), размеры (от 1 мм до 20—30 см в диаметре) и массу (до 20 кг). Клетки склероциев богаты запасными питательными веществами – гликогеном, жирами. В склероциях спорыньи, например, содержится до 30% жира. Склероции образуют многие сумчатые, базидиальные и несовершенные грибы. Формируются они либо свободно на поверхности мицелия, либо внутри пораженного органа. Из склероциев развиваются мицелий или органы спороношения.

Существуют и другие приспособительные видоизменения мицелия у грибов – гаустории, аппрессории, ризоиды, столоны, ловушки и др., связанные со способом их питания. Например, гаустории характерны для паразитов и представляют собой специальные веточки мицелия, проникающие в клетки хозяина и поглощающие из них питательные вещества.

Строение клетки. Клетка большинства грибов и грибоподобных организмов одета плотной оболочкой, состоящей в основном (на 80—90%) из полисахаридов, связанных с белками и липидами. Кроме того, в ее состав входят азотсодержащий полисахарид хитин (у зигомикот, аскомикот, базидиомикот и анаморфных грибов), полифосфаты, пигменты, меланины, глюканы и другие вещества. У оомикот клеточная стенка включает целлюлозу.

Протопласт клеток содержит одно или несколько ядер, митохондрии, эндоплазматическую сеть, рибосомы, лизосомы, вакуоли, а также специфические для них структуры в виде пузырьков – ломасомы, которые образуются между клеточной стенкой и плазматической мембраной. Функция ломасом еще окончательно не установлена. Комплекс Гольджи обнаружен у небольшого числа грибов ( некоторые представители хитридиомикот). Он типичен для грибоподобных организмов

Запасными питательными веществами являются гликоген, дисахарид трегалоза, сахароспирты (маннит, сорбит, ксилит), волютин, масло. Крахмал в клетках не образуется.

Задание 1. Изучите строение дрожжеподобного таллома.

Ход работы. На предметное стекло пипеткой нанесите каплю суспензии пекарских дрожжей Saccharomyces cerevisiae (забродившей жидкости).

Аккуратно положите сверху покровное стекло. Рассмотрите полученный препарат при большом увеличении (10 х 40, 10 х 10).

Зарисуйте: строение таллома пекарских дрожжей.

Обозначьте на рисунке цитоплазму, клеточную стенку.

Задание 2. Изучите строение грибов, мицелиальных тяжей Lycoperdon sp.

Ход работы. Внимательно рассмотрите кусок древесины или коры дерева, на котором образовались плодовые тела дождевиков - Lycoperdon sp.

Найдите на нём отходящие от плодовых тел длинные нитевидные структуры – мицелиальные тяжи. Отделите небольшой фрагмент мицелиального тяжа, поместите его в каплю воды на предметном стекле и слегка растеребите препаровальными иглами. Затем накройте покровным стеклом и рассмотрите полученный препарат при малом (4 х 10) и большом (10 х 40) увеличении.

Зарисуйте: строение гиф, составляющих мицелиальный тяж.

Обозначьтена рисунке клеточную стенку, септы, цитоплазму.

Задание 3. Изучите строение грибов, плектенхимы.

Ход работы. Приготовьте срез. Для этого необходимы два лезвия безопасной бритвы. Одно из них может быть не особенно острым, так как им на предметном стекле будет фиксироваться объект. Второе лезвие должно быть острым (или же его можно заменить скальпелем). Отрежьте от шляпки гриба Agaricus bisporus (шампиньон двуспоровый) фрагмент размером примерно 1 х 5 х 10 мм. Положите его на предметное стекло и левой рукой прижмите его с помощью лезвия безопасной бритвы так, чтобы из-под края лезвия выступал лишь небольшой участок фрагмента шляпки. Затем острым лезвием или скальпелем отсеките этот выступающий участок. Таким образом, получится ровный срез фрагмента шляпки. Затем слегка, на доли миллиметра, отодвиньте в сторону прижимающее лезвие и острым лезвием отрежьте освободившийся участок. Получится тонкий срез шляпки гриба. Его необходимо перенести в каплю воды, накрыть покровным стеклом и рассмотреть при большом увеличении (10 х 40).

Зарисуйте: взаимное расположение гиф, образующих волокна плектенхимы шляпки плодового тела Agaricus bisporus.

Обозначьте на рисунке клеточную стенку, септы, цитоплазму.

Контрольные вопросы и задания:

1. Опишите особенности организации разных типов талломов грибов.

2. Какой тип организации таллома имеют пекарские дрожжи?

3. Как называются поперечные перегородки в гифах грибов?

4. Какие видоизменения вегетативных гиф Вам известны?

5. Какое строение имеют мицелиальные тяжи?

6. Какое строение имеет плектенхима шляпки Agaricus bisporus?

Наши рекомендации