Полуколичественное определение белка

ПРИНЦИП МЕТОДА: метод основан на реакции Геллера с концентрированной азотной кислотой. Путем последовательного разведения мочи достигают такого максимального разведения, при котором еще появляется кольцо между 2-й и 3-й минутой.

ХОД РАБОТЫ:

1.отмерить в 4 пробирки по 1 мл HNO3;

2. в других 4-х пробирках приготовить разведения мочи по схеме:

ОТМЕРИТЬ ОПЫТ 1 ОПЫТ 2 ОПЫТ 3 ОПЫТ 4 и т.д.
Разведение Моча Н2О неразвед. 1,0 мл - 1 : 10 0,1 мл 0,9 мл 1 : 20 0,1 мл 1,9 мл 1 :30 0,1 мл 2,9 мл  
Наслоить с помощью пипетки разведенную мочу (1мл) на азотную кислоту
HNO3 конц., 1,0 мл 1,0 мл 1,0 мл 1,0 мл  

РЕЗУЛЬТАТ:

КОНЕЧНЫЙ РЕЗУЛЬТАТ: Умножают разведение на 0,033, получают содержание белка в моче в г/л.

КЛИНИКО-ДИАГНОСТИЧЕСКОЕ ЗНАЧЕНИЕ: то же, что и в работе “Качественная реакция на белок”.

В Ы В О Д:

КАЧЕСТВЕННОЕ ОПРЕДЕЛЕНИЕ ГЛЮКОЗЫ В МОЧЕ (проба Гайнеса).

ПРИНЦИП МЕТОДА: метод основан на способности глюкозы восстанавливать при нагревании в щелочной среде гидроксид меди в оксид меди красного цвета.

ХОД РАБОТЫ: взять пробирку: опыт

ОТМЕРИТЬ ОПЫТ
Реактив Гайнеса Моча 9 капель 2 капли

Перемешать, нагреть до начала кипения.

РЕЗУЛЬТАТ:

КЛИНИКО-ДИАГНОСТИЧЕСКОЕ ЗНАЧЕНИЕ: Присутствие глюкозы в моче – глюкозурия наблюдается при сахарном диабете, при поражении почек, отравлении оксидом углерода, эфиром, хлороформом и т.д.

Алиментарные физиологические глюкозурия и фруктозурия встречаются только у грудных детей, что связано с физиологической незрелостью транспортных систем, участвующих в реабсорбции этих углеводов. Галактоза, пентозы и дисахариды никогда не подвергаются реабсорбции, вследствие чего у детей грудного возраста (особенно у недоношенных новорожденных) возможны алиментарные галактозурия, пентозурия, дисахаридурия в физиологических условиях. Обычно галактозурия и лактозурия исчезают у детей к 10-му дню жизни, но иногда могут сохраняться дольше.

В Ы В О Д:

4. экспресс-методы

Дата: ______________

ЗАНЯТИЕ № 36

РАБОТА № 1: ОПРЕДЕЛЕНИЕ ОБЩЕГО БЕЛКА В СПИННОМОЗГОВОЙ ЖИДКОСТИ БИУРЕТОВЫМ МЕТОДОМ

ОБОСНОВАНИЕ ВЫПОЛНЕНИЯ РАБОТЫ. Содержание белка в спинномозговой жидкости, в отличие от сыворотки крови, незначительно. Определение общего белка в спинномозговой жидкости имеет большое значение для диагностики опухолей мозга и воспалительных заболеваний центральной нервной системы.

ХИМИЧЕСКИЙ МЕХАНИЗМ МЕТОДА. Раствор белка в щелочной среде в присутствии сульфата меди (NaOH/CuSO4) окрашивается в сине-фиолетовый цвет. Интенсивность окраски прямо пропорциональна концентрации белка в сыворотке крови и определяется фотометрически.

ХОД РАБОТЫ: взять опытную и контрольную пробирки.

ОТМЕРИТЬ ОПЫТ КОНТРОЛЬ  
РЕАКТИВ ГОРНАЛА СПИННОМОЗГОВАЯ ЖИДКОСТЬ NaCl 0,9%   4,0 мл   0,1 мл -     4,0 мл   - 0,1 мл
Перемешать, фотометрия через 20 минут. Кювета 1 см, λ=540 нм (зеленый светофильтр)

РЕЗУЛЬТАТ:

Еоп =

С общего белка =


КЛИНИКО-ДИАГНОСТИЧЕСКОЕ ЗНАЧЕНИЕ.

Нормальное содержание общего белка в спинномозговой жидкости – 0,22-0,33 г/л.

Гиперпротеинорахия – увеличение уровня белка в СМЖ наблюдается при менингитах (серозный и гнойный), опухолях головного мозга, полиомиелите, арахноидите, кровоизлияниях в мозг, абсцессах мозга, рассеянном склерозе.

Гипопротеинорахия – снижение уровня белка в СМЖ отмечается при гидроцефалии, гиперсекреции ликвора, доброкачественной внутричерепной гипертензии.

ВЫВОД:

РЕФЕРЕНТНЫЕ ВЕЛИЧИНЫ ОСНОВНЫХ БИОХИМИЧЕСКИХ ПОКАЗАТЕЛЕЙ У ВЗРОСЛЫХ

КРОВЬ

Показатель Значение
АлАТ 0,1 - 0,68 ммоль/ч×л
Альбумины 40 - 50 г/л
Амилаза 16 -30 г/ч×л
АсАТ 0,1 - 0,45 ммоль/ч×л
Белок общий 65 - 85 г/л
Билирубин общий 5,0 - 20,5 мкмоль/л
Гемоглобин 115 - 145 г/л (женщины) 130 - 160 г/л (мужчины)
Глобулины 20 - 30 г/л
Глюкоза 3,3 - 6,4 ммоль/л
Железо 8,8 - 31,0 мкмоль/л
Калий 3,2 - 5,6 ммоль/л
Кальций 2,25 - 2,75 ммоль/л
Креатинин 53 – 115 мкмоль/л
Мочевая кислота 140-340 мкмоль/л у женщин 200-415 мкмоль/л у мужчин
Мочевина 2,5 - 8,33 ммоль/л
Натрий 130 - 155 ммоль/л
Общие липиды 4,0 - 8,0 г/л
Триглицериды 0,4 - 1,54 ммоль/л у женщин 0,45 – 1.82 ммоль/л у мужчин
Фибриноген 2 - 4 г/л
Хлор 95 - 110 ммоль/л
Холестерин 3,1 - 5,2 ммоль/л

МОЧА

Показатель Значение
Амилаза 28 -160 г/ч×л
Мочевая кислота 1,6 – 6,44 ммоль/сут
Мочевина 333 – 583 ммоль/сут

СПИННОМОЗГОВАЯ ЖИДКОСТЬ

Наши рекомендации